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仅供科研使用,不得用于临床检验.

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)定量检测试剂盒(ELISA)

说明书
货号:INS2080027

使用前,请务必仔细阅读说明书,如有不清楚的,请拨打

24h
技术支
持专线:0714-6338558

或18171667592/18108699172,咨询清楚再进行实

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2  【产品名称】
通用名称:人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)定量检测试剂盒(ELISA)

英文名称:Human
Tissue-type

Plasiminogen

Actilyse(t-PA)ELISA

KIT
【包装规格】
48  人份/盒,96
人份/盒
【预期用途】
仅供科研使用,定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)

的浓度.
【检验原理】
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)

.在预包被抗人组织型纤溶酶原激

活剂(t-PA)抗体(固相抗体)的微孔酶标板中,加入人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)校准品

和待测样本,再加入另一株

HRP
标记的抗人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)抗体(酶标抗体)

,  经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体

的夹心复合物.加底物
A  和B,底物在
HRP
催化下,产生蓝色产物,在终止液(2M

硫酸)作
用下,最终转化为黄色,在酶标仪上测定吸光度(OD

值)  ,吸光度(OD
值)与待测样品中人
组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的浓度正相关.拟合校准品曲线,可以计算出样本中人组织型

纤溶酶原激活剂(t-PA)的浓度.

【主要组成成分】
主要成分
组分  数量  主要成分
校准品
0.5ml/管*6
管  抗原配制的
6  个浓度标准品
包被微孔板
96T
预包被固相抗体
HRP
标记抗体
6mL
HRP
标记的检测抗体
底物液
A  6mL
过氧化脲工作液
底物液
B  6mL
TMB
工作液
20*浓缩洗涤液
30mL
含0.15%Tween20

的PBS
终止液
6mL
2M  硫酸工作液
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3  说明书
1  份--
自封袋
1  个--
不干胶
2  片--
校准品浓度依次为:24、12、6、3、1.5、0.75

ng/mL.校准品已经通过测试,结果表明

HBs
抗原阴性,HIV1、HIV2

和HCV
抗体阴性,由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这

些物质,本品必须按照具有潜在的感染性进行处理,处理过程应当遵循通用的安全措施.

需要但未提供的材料及耗材

1、能够检测
450
nm  吸光度的酶标仪.
2、精密移液器及一次性吸头

3、蒸馏水或去离子水
4、洗瓶或者自动洗板机

5、37℃水浴锅或恒温箱

6、1L
量筒  7、无粉一次性乳胶手套

8、稀释用聚丙烯试管
【储存条件及有效期】
1、2-8℃保存,切勿冷冻,有效期

6  个月.
2、开封使用后,包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中,密闭自封袋,并将全部试剂放回

2-8℃冰箱.
3、开封后,按照建议的条件保存,校准品、包被微孔板和

HRP
标记抗体,有效期为
28  天,  其他成分在标签标明的有效期内是稳定的.

【适用仪器】
半自动的酶标仪,如Thermo

MK3,或者国产酶标仪.

【样本要求】
样本类型和采集
以下只是列出样品采集的一般指南.所有样本采集过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂.

1、细胞培养上清:4000rpm

条件下离心
20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在-

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4  20℃以下,避免反复冻融.

2、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm

条件  下离心
20min,小心地分离出血清,保存在-

20℃以下,避免反复冻融.

3、血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂.在4000rpm

条件下,离心
20  分钟取上
清,血浆保存在-20℃以下,避免反复冻融.

样本保存和稳定性
样本在
2-8℃条件下,可以储存

72h,或者在-
20℃储存
6  个月.样本收集后,不是一次

检测完,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温下解冻,确保样品均匀充分

解冻.
【试剂准备】
1、使用前,所有的组分都要至少复温

30min,确保充分复温到室温.

2、浓缩洗涤液:从冰箱取出的浓缩洗涤液,会有结晶产生,这属于正常现象,水浴加热

使结晶完全溶解.浓缩洗涤液与蒸馏水,按1:20

稀释,即1份的浓缩洗涤液,添加

19  份的  蒸馏水.
3、底物:底物液
A  和B,在使用前,按1:1

体积充分混合,混合后
15  分钟内使用.
操作程序
1、所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔.

2、按前面试剂准备中描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液.

3、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱.

4、设置标准品孔、样本孔和空白孔,标准品孔各加不同浓度的标准品

50μL,样本孔加待测

样本  50μL,空白孔不加.

5、除空白孔外,标准品孔和样本孔,加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体

100μL.
6、用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育

60min.
7、揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置

20s,甩去洗涤液,吸水

纸上拍干.
8、如此重复
4  次(共洗板
5  次)  .若使用自动洗板机,请按洗板机操作程序进行洗板,添加

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5  浸泡  20s
的程序,可以提高检测的精度.洗板结束,加底物前,要在干净不掉屑的纸上,充

分拍干反应板.
9、将底物
A  和B按1:1
体积充分混合,所有孔中加入底物混合液

100μL.用封板膜盖住反

应板,37℃水浴锅或恒温箱温育

15min.
10、所有孔加入终止液

50μL,在酶标仪上读取各孔吸光度(OD

值)  .  【检验结果的解释】
检测完成后,以标准品浓度做为纵坐标,对应的吸光度(OD

值)作为横坐标,利用计算

机软件,
采用四参数
Logistic
曲线拟合
(4-pl)
,  创建标准曲线方程,
通过样本的吸光度
(OD
值),利用方程计算样品的浓度值.

如果样品被稀释,通过上述方法测的的浓度值,要乘以稀释倍数,才是样品的最终浓度.

【检验方法的局限性】
1、仅供科研使用,不得用于临床诊断.

2、在试剂盒标示的有效期内使用,过期产品不得使用.

3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用.

4、使用试剂盒配套的样品稀释液.

5、如果样本值高于标准曲线最高浓度,请用检测缓冲液稀释样本,并重新检测.如果细胞

培养上清样本需要较大的稀释倍数,请用细胞培养基进行适度稀释.

6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果,检测前,请排除该因素.

7、通过其他方法得到的检测结果,与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性.

【产品性能指标】
1、物理性能
试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物.微孔板铝箔袋应真空包装,无破

损漏气.
2、剂量反应曲线线性
校准品剂量反应曲线相关系数

r  值,大于等于
0.9900.
3、精密度
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6  批内精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在同一个板块内精度评估.

批内变异系数
CV%小于
10%.
批间精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在不同板块内精度评估.批

间变异系数
CV%小于
15%.
4、灵敏度
最低检出剂量小于
0.1ng/mL.
5、回收率
三组已知的高、中、低浓度样品,进行五次回收率评估,回收率在

85%-115%之间.

6、特异性
本试剂盒识别天然和重组人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA),与结构类似物无交叉.

稳定性
2℃-8℃保存,有效期

6  个月.
【注意事项】
生物安全
1、检测必须符合实验室管理规范的规定,严格防止交叉污染,所有样品、洗弃液和各种废

弃物都应按照传染物进行处置.

2、试剂盒的液体组分中,含有

proclin-300

防腐剂,可能引起皮肤过敏反应,避免吸入烟

雾与皮肤接触.
3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入烟雾.戴上防护手套,实验完成

后彻底洗手.
4、试剂盒中的终止液为酸性溶液,在使用终止液时,请佩戴防护服,及防护眼睛、手及面

部的设施.
5、本试剂盒用于科学研究,不能用于诊断治疗.

6、请不要使用其他批号或其他来源的试剂替代本试剂盒中的试剂.

技术要点
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7  1、重溶或者混合蛋白溶液时,避免起泡.

2、  加标准品与样本时,
每个标准品浓度和样本都要更换移液枪头,

公共组分应该悬臂加样,

避免交叉污染.
3、合适的温育时间,和充分的洗涤步骤,是保证实验结果准确性的必要条件.

4、底物溶液为无色液体,保存过程中变为蓝色,代表底物溶液已经失效,不得使用.

5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致,加入终止液后,蓝色底物产物,会瞬间变为

黄色.
6、实验中,用剩的板条,应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存.

7、所有液体组分,使用前充分摇匀,严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行

温育操作.
废物处理
所有使用或未使用的试剂,所有污染性的一次性材料,应当遵循传染性或潜在传染性产品

的处理程序,每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别,进行废物和污物的处理,

同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物.

【基本信息】
企业名称:黄石市艾恩斯生物科技有限公司

生产地址:湖北省黄石市黄石港区磁湖路

41  号  固定电话:0714-6338558

网址:www.inselisa.com

邮箱:postmaster@inselisa.com

【说明书批准日期及修改日期】

批准日期:2013.05.12

第一次修改日期:2016.02.16


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